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    大鼠elisa檢測試劑盒TSZ

    大鼠elisa檢測試劑盒TSZ

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    細胞:用PBS反復洗滌細胞3次,調整細胞濃度達到04-06/ml 左右,通過反復凍融,使細胞破壞并放出細胞內成份,或者細胞超聲粉碎,離心取上清液檢測。

    大鼠elisa檢測試劑盒TSZ 詳細資料

    實驗材料與試劑配制:
    . 儀器與材料:酶標儀(使用前預熱30分鐘),微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水,濾紙。
    2. 緩沖液使用:加5ul 的緩沖液于50ul 的樣品中,如果樣品量不夠或者不確定,緩沖液和樣品的混合比例不要小于:0即可?;靹?,靜置小時備用(如果標本是血清或者血漿,此步驟忽略)。
    3. 洗液的配制:按:00的比例配制洗液備用。
    樣品收集、處理及保存
    . 細胞培養上清:適用于檢測體外培養的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液,以000×g離心5分鐘,收集上清。
    2. 細胞:用PBS反復洗滌細胞3次,調整細胞濃度達到04-06/ml 左右,通過反復凍融,使細胞破壞并放出細胞內成份,或者細胞超聲粉碎,離心取上清液檢測。
    3. 血清:在室溫下,血液自然凝固,以000×g離心5分鐘,取上清待測。
    4. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置0-20 分鐘后,以000×g離心5分鐘,收集上
    清。
    5. 體液:包括胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內毒素的離心管收集,以000×g離心5分鐘,收集上清。
    6. 組織標本:切取組織標本,稱取重量0.5mg,加入500ul 的PBS,用手工或勻漿器,或超聲破碎儀將標本勻漿,以2000-3000rmp離心20 分鐘,收集上清進行檢測。
    7. 樣品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
    8. 保存:如果樣品不能立即檢測,應將其分裝,-70 ℃保存,避免反復冷凍。保存過程中如出現沉淀,應再次離心。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
    原理:
    采用雙抗體夾心法測定人雄激素結合蛋白(ABP)水平。用純化的人雄激素結合蛋白(ABP)抗體包被微孔板,制成固相載體,實驗時依次在微孔板中加入樣本及標準品,并加入 HRP 標記的 ABP 抗體,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,反復洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉化為藍色,再用硫酸終止反應,轉變成黃色。顏色的深淺和樣品中的 ABP含量呈正相關。采用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度(OD 值),根據標準曲線,計算測試樣品中 ABP 濃度。 
    操作步驟:
    . 取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置 30 分鐘。
    2. 分組:取出 96 孔板,根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數,把剩余的板條繼續冷藏處理。分別設標準
    品組(6 個濃度)、空白孔、待測樣品組。
    注:為減少實驗誤差,保證準確性,建議設置復孔。
    3. 加樣:依照標準品的順序分別加入 50ul 的標準品溶液于空白微孔中;空白對照孔加入 50ul 的蒸餾水;其余微孔中加入 50ul
    的待測樣本。
    4. 加酶標溶液:標準品組、待測樣本組各孔中加入 00ul 的酶標溶液(空白對照孔除外)。
    5. 溫育:酶標板用封板紙密封后,放入濕盒內于 37℃恒溫孵育 小時。
    6. 洗板:用稀釋后的洗滌液注滿每孔,靜置 5-30s,充分清洗酶標板 5 次,用吸水紙徹底拍干。
    7. 顯色:各孔加入顯色劑 A 液 50ul 后,再加入顯色劑 B 液 50ul。
    8. 終止:25-37℃下避光反應 0-5 分鐘,加入 50ul 終止液。
    9. 讀板:在 450nm 波長讀取各孔的 OD 值。
    注:讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡,讀板時間控制在終止反應后的 30 分鐘內,以免影響準確性。
    注意事項:
    . 實驗操作中必須使用一次性吸頭,避免交叉污染。
    2. 加樣:加樣時,要控制加樣速度,避免*孔與后一孔間的時間間隔過大,否則將會導致不同的預孵育時間,從而影響實驗的準確性以及重復性。
    3. 孵育:嚴格按照說明書上規定的孵育時間和溫度進行。
    4. 反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化,如果顏色較深,請提前加入終止液終止反應。
    5. 建議實驗前預測樣品含量,如樣品濃度過高,應對樣品進行稀釋,計算結果時乘以相應的稀釋倍數。
    6. 建議使用本試劑盒時先做預實驗(即先做標準曲線,試用幾個標本),如果對本試劑盒有任何疑問,可和所購經銷商溝通,如果因運輸過程導致試劑盒失效,可要求調換,但概不承擔產品本身以外的任何損失。
    安全性
    . 避免人體直接接觸顯色劑A、B和終止液。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
    2. 實驗中不要進食、抽煙或使用化妝品。
    3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
    保存條件及有效期:
    .試劑盒保存:2-8℃
    2.有效期:6個

     

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