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    芹菜源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒?实验方法步骤
    点击次数:60 发布时间:2022-03-17

    芹菜源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒实验方法步骤:


    方法


    1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     


    10×PCR buffer                   


    5 μl     dNTP mix (2mM)             


    4 μl     引物1(10pM)                 


    2 μl     引物2(10pM)                 


    2 μl     Taq酶 (2U/μl)               


    1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  


    1 μl      加ddH2O至 50 μl  


    视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。


    2调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。


    3结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。


    4PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。


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