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    技術文章

    使用Elisa試劑盒進行檢測需全面質量控制
    點擊次數:494 發布時間:2022-01-14
      Elisa試劑盒因其操作簡單,靈敏度高,特異性好,經濟安全等特點而在臨床上廣泛應用,但是由于其操作步驟復雜,一般包括試劑準備,樣本收集,加樣,溫育,洗滌,顯色,比色,結果判定等,其中任何一項操作不當都會對檢測結果產生很大影響。因此,必須加強ELISA檢測的全面質量控制,保證其結果的準確可靠。
     
      1.試劑
     
      好的試劑是保證檢驗質量的基礎。從4℃冰箱取出的試劑必須放置室溫20~30 min 后再啟用,否則水化層的形成可能影響試劑的原始濃度及試劑中溶質分子的均勻分布。未用完的試劑和質控品應密封并及時放回冰箱保存。根據蛋白質在冷凍過程中出現蛋白分子分布改變的特點,試劑正式啟用前應充分混勻。所用蒸餾水、去離子水和自行配制的緩沖液等,都必須調整其pH 值和離子強度等。不同批次的試劑在制作過程中很難保證質量完全一致,因此必須選擇和訂購長批號的試劑,并保證保存條件,嚴格執行這一標準可以避免試劑批號改變而重建質控體系及重新評估試劑的復雜過程,并且能夠保證結果的穩定性。
     
      2.標本
     
      患者標本中有可能含有干擾試驗的免疫物質,導致假陽性或假陰性的結果,干擾因素一般可分為兩類,即內源性和外源性干擾因素。內源性干擾因素一般包括類風濕因子、補體、高濃度的非特異性免疫球蛋白、異嗜性抗體及某些自身抗體等,避免內源性干擾因素主要通過選擇合適的試劑;外源性干擾因素包括標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存時間過長及標本凝固等。要注意避免標本出現嚴重溶血,標本中血紅蛋白中含有血紅素基因,其具有類過氧化物的活性,因此,在以辣根過氧化物酶(HRP)為標記的ELISA測定試驗中,容易在溫育過程中吸附于固相,從而與加入的底物反應顯色。標本在低溫下保存時間過長,IgG可聚合成多聚體,在間接法ELISA測定中會導致本底加深,甚至出現假陽性結果。通常血清標本可在2~8℃保存1 周,冷凍保存時間會更長。血清標本應充分離心,否則可因纖維蛋白原非特異吸附于微孔而造成假陽性結果。冷凍保存標本避免反復凍融,標本的反復凍融會因其所產生的機械剪切力對標本中的蛋白等分子產生破壞作用,使抗體效價下降從而引起假陰性結果。標本的采集及分離要注意盡量避免細菌的污染。此外,標本在凍存時會因蛋白質局部濃縮分布不均,因此重新溶解的標本必須混勻,但不要劇烈振蕩和反復顛倒。

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